細(xì)胞培養(yǎng)是大多數(shù)生物實(shí)驗(yàn)室都會遇到的基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，但不是非常簡單的實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)蘊(yùn)含著大學(xué)問。細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)不好相信每個細(xì)胞培養(yǎng)者都遇到過。有時候細(xì)胞狀態(tài)不好，轉(zhuǎn)染 、藥篩這些實(shí)驗(yàn)根本就沒辦法做。影響細(xì)胞培養(yǎng)的因素很多，但首要因素是選好合適的細(xì)胞培養(yǎng)基。很多研究者只對一兩種培養(yǎng)基比較了解，下面讓我們詳細(xì)介紹一下各種培養(yǎng)基的不同之處。

培養(yǎng)基

      基礎(chǔ)培養(yǎng)基絕大多數(shù)是建立在平衡鹽溶液（BSS）基礎(chǔ)上，添加了氨基酸、維生素和其它與血清中濃度相似的營養(yǎng)物質(zhì)。廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是MEM ，其中含有13種必須氨基酸、8種維生素。

   目前科研市場經(jīng)典的培養(yǎng)基有很多種，其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是應(yīng)用廣泛的培養(yǎng)基。其他如M199、IMDM、L15培養(yǎng)基等也用于某些細(xì)胞的培養(yǎng)。

◆ MEM是由基礎(chǔ)培養(yǎng)基(BME)發(fā)展而來的，其中增加了組分的范圍及濃度。

◆ 改良的基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)基也就是我們所說的DMEM培養(yǎng)基最初是為小鼠成纖維細(xì)胞培養(yǎng)專門設(shè)計的，現(xiàn)在常用于貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM的氨基酸濃度是MEM的兩倍，維生素濃度是MEM的4倍，采用雙倍的HCO3-和CO2濃度起到更好的緩沖作用。最初的配方中葡萄糖含量為1000 mg/L，后來為了某些細(xì)胞的生長需要，將葡萄糖含量又調(diào)整為4500 mg/L，這就是大家常說的低糖和高糖了。

◆ a-MEM含有附加的氨基酸、維生素以及核苷和脂肪酸，它可廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞類型，包括對營養(yǎng)成分要求苛刻的細(xì)胞。

◆ Ham’s F12是為在低血清濃度下克隆CHO細(xì)胞而設(shè)計的，現(xiàn)在也廣泛應(yīng)用于克隆形成率的分析及原代培養(yǎng)。F12還可以與DMEM 等體積混合使用，得到一種高濃度與成分多樣化相結(jié)合的產(chǎn)物，這種培養(yǎng)基已應(yīng)用于許多原代培養(yǎng)及更難養(yǎng)的細(xì)胞系的培養(yǎng)。

◆ RPMI 1640培養(yǎng)基是專為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)而設(shè)計的，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)。

   很多新人經(jīng)常困惑細(xì)胞該用哪一種培養(yǎng)基呢?其實(shí)這個問題的答案可以很簡單，也可以好復(fù)雜。如果這種細(xì)胞是購自細(xì)胞庫，那您直接問供應(yīng)商就行了，他們會給您一個很合適的推薦。如您不知道細(xì)胞的來源，您也可以找到相關(guān)的文獻(xiàn)，基本文獻(xiàn)中使用的培養(yǎng)基都可作為參考。但如果你是著手建立一種全新細(xì)胞的培養(yǎng)體系，根本找不到任何參考，那你就得花點(diǎn)時間自己試驗(yàn)。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長。總之，選MEM做貼壁細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI 1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)會是一個好的開始。最好同時選購幾種不同的培養(yǎng)基同時進(jìn)行培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)來選擇其中特別適合的。有時候你會驚訝地發(fā)現(xiàn)你的最佳培養(yǎng)條件與文獻(xiàn)報道的不同，就算是同一種培養(yǎng)條件，細(xì)胞的生長狀態(tài)也時好時壞，這是很正常的。因?yàn)樵噭⑺?、不同批號的血清之間都存在著差異。要提高培養(yǎng)基的穩(wěn)定性，可以從培養(yǎng)基和血清兩方面入手。

   以前大部分實(shí)驗(yàn)室都是用干粉培養(yǎng)基，但干粉有很多弊端

   1. 配制過程就較為繁瑣，要溶解、調(diào)pH值，過濾，過程中可能會產(chǎn)生一些濃度誤差;

   2.有些實(shí)驗(yàn)室的水質(zhì)并不理想，所以培養(yǎng)的效果會有差異。

   如果使用液體培養(yǎng)基，這種人為的誤差會減少，因?yàn)楫吘故谴笈抗I(yè)化生產(chǎn)的，批間差會很小。

血清

   說到細(xì)胞培養(yǎng)，血清固然是細(xì)胞培養(yǎng)中不可少的成分，但血清的批間差異大，更換血清時需要做大量的測試以取保替換的血清與原來的相似。而血清的供應(yīng)也是必須要考慮的因素。由于氣候或瘋牛病等的影響，血清貨源的問題對實(shí)驗(yàn)的影響可非同小可。另外，血清的價格也很昂貴，高品質(zhì)的澳洲血清價格更高。因此，也有一些實(shí)驗(yàn)室開始換用無血清培養(yǎng)基。

無血清培養(yǎng)基(Serum-Free Media)

   通常以SFM表示，顧名思義，就是在細(xì)胞培養(yǎng)中不需要添加血清，但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細(xì)胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分：粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等，能減少上述血清帶來的不利因素，使細(xì)胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。但它也不是特別好的，從有血清培養(yǎng)過渡到無血清培養(yǎng)的條件并不像想象中那么直截了當(dāng)。處于發(fā)育的不同分化階段的細(xì)胞(例如干細(xì)胞與定向前體細(xì)胞相比)需要不同的配方，對生長因子和細(xì)胞因子的選擇尤為重要。而且在去除血清的同時，也去除了一些血清蛋白具有的保護(hù)、解毒作用，因此對試劑、水的純度和儀器清潔度的要求更高。另外，它的價格也比普通的培養(yǎng)基貴很多。

細(xì)胞培養(yǎng)基應(yīng)用選擇
    選擇培養(yǎng)基沒有固定的標(biāo)準(zhǔn)，有幾點(diǎn)建議可供您參考：
（1） 建立某種細(xì)胞株所用的培養(yǎng)基應(yīng)該是培養(yǎng)這種細(xì)胞第一個要選的培養(yǎng)基。可以查閱參考文獻(xiàn)，或在購買細(xì)胞株時咨詢。
（2） 其它實(shí)驗(yàn)室慣用的培養(yǎng)基不妨一試，許多培養(yǎng)基可以適合多種細(xì)胞。
（3） 根據(jù)細(xì)胞株的特點(diǎn)、實(shí)驗(yàn)的需要來選擇培養(yǎng)基。如小鼠細(xì)胞株多選 RPMI1640。
（4） 用多種培養(yǎng)基培養(yǎng)目的細(xì)胞，觀察其生長狀態(tài)，可以用生長曲線、集落形成率等指標(biāo)判斷，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果選擇最佳培養(yǎng)基，這是最客觀的方法，但比較繁瑣。

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